多克隆抗體特點(diǎn)：

1.識(shí)別任一抗原上的多個(gè)表位，所得血清為異質(zhì)性抗體混合物，親和力各有不同

2.主要有IgG亞類組成
3.通常使用多肽免疫原制備以獨(dú)有表位為靶標(biāo)的多克隆抗體，尤其是針對(duì)高同源性蛋白家族

優(yōu)劣勢(shì)：

1. 高親和性：由于靶蛋白上的多個(gè)表位能夠結(jié)合不止一個(gè)抗體分子，多抗可放大低表達(dá)水平靶蛋白的信號(hào)
2.可識(shí)別多個(gè)表位，有利于免疫沉淀和染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)獲得更好的結(jié)果
3.與相似抗原有更多交叉反應(yīng)，可放大低表達(dá)信號(hào)，染色背景干擾較高
4.對(duì)微小抗原變化的包容性更強(qiáng)，可檢測(cè)同源性的蛋白家族

單克隆抗體特點(diǎn)：

1. 識(shí)別一個(gè)抗原上的單一抗原表位
2.僅由一種抗體亞型組成（IgG1、IgG2、IgG3）如需使用二抗進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)針對(duì)正確的亞類選擇抗體

優(yōu)劣勢(shì)：

1.高特異性：?jiǎn)慰惯m用于實(shí)驗(yàn)中的一抗，產(chǎn)生背景染色信號(hào)通常顯著低于多克隆抗體
2.與多抗相比，同質(zhì)性較高，結(jié)果重現(xiàn)性較高
3.特異性地檢測(cè)一個(gè)靶表位，不易與其它蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，染色背景干擾低
4.檢測(cè)單一抗原或蛋白質(zhì)家族的單一成員

用于生產(chǎn)抗體的宿主具有許多種,最常見的兩種是小鼠和兔子。小鼠通常是用于產(chǎn)生單克隆抗體的宿主,具有免疫周期較短、成本較低等優(yōu)勢(shì)。小鼠抗體可用于早期發(fā)現(xiàn)研究，體內(nèi)臨床前治療研究,體外診斷。與小鼠相比,兔子具有較高的成功率和更廣泛的抗原適應(yīng)范圍。兔子抗體可以識(shí)別更多種類的表位,與小鼠抗體相比具有更高的親和力和特異性。

減少免疫原性、保持親和力和特異性、提高臨床應(yīng)用的安全性和有效性

抗體設(shè)計(jì)涉及到多個(gè)方面，包括免疫原的設(shè)計(jì)、免疫過(guò)程的優(yōu)化、目的抗體篩選、抗體純化、應(yīng)用鑒定等。免疫原可以是天然蛋白、重組蛋白、多肽或DNA。設(shè)計(jì)免疫原時(shí)，需考慮免疫原分子的特點(diǎn)和抗體的應(yīng)用，以確定使用哪種類型的免疫原和免疫原的序列。

抗體發(fā)現(xiàn)的方法包括噬菌體展示技術(shù)、雜交瘤技術(shù)等。其中，噬菌體展示技術(shù)是一種將外源蛋白或多肽的編碼基因插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)，將外源蛋白或多肽展示在噬菌體表面，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)蛋白或多肽與相應(yīng)受體結(jié)合的技術(shù)。

原理不同：

5’RACE是在低豐度轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5’端

多重PCR與普通PCR相同

擴(kuò)增區(qū)域：

5’RACE可擴(kuò)增區(qū)域?yàn)镃DR1-3

多重PCR可擴(kuò)增區(qū)域?yàn)镃DR3

疫苗的設(shè)計(jì)與評(píng)估、腫瘤診斷、自身免疫性疾病等

雜交瘤細(xì)胞測(cè)序相較于直接對(duì)抗體進(jìn)行基于蛋白質(zhì)分析的測(cè)序相比,提供更準(zhǔn)確更可靠的結(jié)果,防止蛋白測(cè)序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區(qū)分等潛在風(fēng)險(xiǎn)。

經(jīng)過(guò)雜交瘤測(cè)序,可以獲得相應(yīng)的序列,在后續(xù)項(xiàng)目中有需要用到單克隆抗體的時(shí)候,可以利用測(cè)得的基因序列進(jìn)行重組抗體的制備。解決了雜交瘤保存過(guò)程中,細(xì)胞死亡或高特異性丟失的問(wèn)題。

慢病毒包裝系統(tǒng)有兩種不同。第一，第二代系統(tǒng)由編碼HIV蛋白gag、pol、rev和tat的包膜質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒組成。第三代系統(tǒng)需要一個(gè)包膜質(zhì)粒和兩個(gè)包裝質(zhì)粒，一個(gè)編碼gag和pol，另一個(gè)編碼rev；第二，第三代包裝系統(tǒng)修改了轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的5'LTR，以消除對(duì)HIV-Tat蛋白的需要，因此被認(rèn)為更安全。

第二代轉(zhuǎn)移質(zhì)粒必須用第二代系統(tǒng)包裝，因?yàn)橐吧?'LTR啟動(dòng)子需要Tat才能發(fā)揮作用。第三代質(zhì)粒可使用任一系統(tǒng)包裝。

1. 無(wú)包膜病毒：腺病毒是一種沒(méi)有包膜的病毒，這使得它在包裝過(guò)程中較為穩(wěn)定，易于制備出高滴度的病毒。

2. 外源基因包裝容量大：腺病毒具有較大的外源基因包裝容量，可以包裝約8kb的外源基因，這使得它成為基因治療等領(lǐng)域的重要載體。

3. 廣泛的宿主范圍：腺病毒能夠感染處于分裂或未分裂的細(xì)胞，具有廣泛的宿主范圍，包括人類和其他動(dòng)物細(xì)胞。

4. 基因組穩(wěn)定：腺病毒的基因組穩(wěn)定，可在未分裂的細(xì)胞中存在數(shù)年且不與宿主發(fā)生整合，這減少了基因突變和致癌的風(fēng)險(xiǎn)。

5. 較為安全：相對(duì)于皰疹病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒等其他病毒載體，腺病毒不會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的人類疾病，因此在臨床應(yīng)用中較為安全。

6. 強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答：腺病毒可通過(guò)特定的整合素進(jìn)入樹突狀細(xì)胞，相對(duì)于其他病毒載體和DNA載體，它能夠刺激更強(qiáng)的免疫應(yīng)答，這在疫苗研究和免疫治療中具有潛在優(yōu)勢(shì)。

AAV在多種細(xì)胞類型中具有較高的轉(zhuǎn)染效率，包括難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。不同的AAV血清型對(duì)不同細(xì)胞和組織的轉(zhuǎn)染效率有所不同。